ChIP實(shí)驗(yàn)超聲波破碎儀操作指南

做ChIP**步就是去確定超聲波破碎儀的參數(shù)設(shè)定，由于設(shè)備品牌不同，各項(xiàng)參數(shù)設(shè)置都需要自己摸索，十分不便。故此依據(jù)經(jīng)驗(yàn)提出以下幾點(diǎn)僅供參數(shù)，希望能給您帶來(lái)幫助。

1.片段長(zhǎng)度，如果是只做ChIP-PCR的話在200-1000范圍內(nèi)都可以，因?yàn)檫@個(gè)長(zhǎng)度便于擴(kuò)增，而ChIP-seq就得在200-500之間，這個(gè)范圍便于測(cè)序。

2.超聲能量，需要做幾個(gè)梯度（如振幅10%-60%，或功率100W-400W），從小到大去測(cè)試，太小不能充分打斷，太大則過(guò)度打斷，甚至?xí)^(guò)熱、起泡。

3.超聲時(shí)間，你需要做幾個(gè)梯度（如1min-5min），這個(gè)是指超聲總時(shí)間，不包括間隔。不要超聲過(guò)久過(guò)度產(chǎn)熱，會(huì)使你的蛋白變性或起泡，因?yàn)槿芤豪镉斜砻婊钚詣?span>SDS。

4.間隔時(shí)間，目的是讓之前單次超聲產(chǎn)生的熱量冷卻下來(lái)，10s-2min不等，一般不比單次超聲時(shí)間短

5.注意事項(xiàng)：a建議*好體積不要太小，否則探頭容易碰壁或離開(kāi)液面，散熱也不夠好；b 整個(gè)超聲過(guò)程*好在冰水混合浴中進(jìn)行，道理如前； c用1.5ml的Ep管超聲不易起泡。

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